磷酸川芎嗪滴丸抗血小板聚集以及對(duì)已聚集的血小板的解聚作用機(jī)制探討
發(fā)布時(shí)間：2024-07-18 17:14:15 | 來源：?【藥物研發(fā)團(tuán)隊(duì) 2024-7-18】
血栓由不溶性纖維蛋白、沉積的血小板、積聚的白細(xì)胞和陷入的紅細(xì)胞組成。在臨床上，血栓一般是指血液在血管內(nèi)流動(dòng)狀態(tài)下形成了固體的形態(tài)，會(huì)影響血液流動(dòng)，甚至造成血管阻塞。血液流動(dòng)緩慢、血液凝固性增強(qiáng)、血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷等都可能形成血栓。血栓形成是發(fā)生血栓性疾病的主要原因之一，而血小板聚集可導(dǎo)致血栓形成。
血小板是一種多功能細(xì)胞，是血液中的有形成分，在血栓形成中起著重要作用。血小板聚集發(fā)生在血管之外，可以發(fā)揮止血作用；血小板聚集發(fā)生在血管之中，可以使血液凝固形成血栓。在正常循環(huán)血液中，血小板處于靜息狀態(tài)，而在某些生理或病理狀態(tài)下，血小板可以在刺激物（誘導(dǎo)劑）的作用下被激活而發(fā)生各種改變，如變形（圓盤形變成球形，表面伸展，形成偽足）、黏附（黏著在非血小板表面）、聚集（血小板之間黏著）和釋放（顆粒內(nèi)容物釋放到周圍環(huán)境中，又稱為分泌）反應(yīng)。血小板的這些改變可以先后出現(xiàn)，或單獨(dú)出現(xiàn)，或以不同組合形式出現(xiàn)。血小板的這些改變可以是生理性的（如血管受損后發(fā)生的原發(fā)性止血），也可以是病理性的。血小板的黏附、聚集和釋放反應(yīng)是血小板在生理?xiàng)l件下止血的基本條件，也是血小板病理?xiàng)l件下形成血栓的主要因素。
當(dāng)血管受損后，內(nèi)皮下的結(jié)締組織暴露，血小板在膠原蛋白的啟動(dòng)下隨即發(fā)生血小板的釋放反應(yīng)。血小板釋放二磷酸腺苷（ADP）、腎上腺素（Adr）、五-羥色胺（5-HT）、血栓素A2（TXA2）等物質(zhì)。在這些物質(zhì)的影響下，血小板聚集成血小板栓子。血小板聚集后，釋放出凝血因子，加之血管壁受損均可激活凝血系統(tǒng)，促進(jìn)纖維蛋白的形成。在血小板栓子形成的基礎(chǔ)上，形成了血小板-纖維蛋白血栓。
臨床上用于預(yù)防和治療血栓性疾病的藥物主要有抗血小板聚集藥物、抗凝血藥物和溶血栓藥物，其中抑制血小板聚集是抗栓治療的主要預(yù)防手段。因此，抗血小板藥物的研究是預(yù)防和治療血栓性疾病的熱點(diǎn)。血小板聚集試驗(yàn)是目前最常用的血小板功能體外診斷方法，在血栓性疾病發(fā)病機(jī)制、臨床診斷、抗血栓療法、監(jiān)測抗血小板藥物濃度等研究中具有重要作用。
磷酸川芎嗪滴丸具有抗血小板聚集，擴(kuò)張小動(dòng)脈，改善微循環(huán)和活血化瘀作用，并對(duì)已聚集的血小板有解聚作用，用于缺血性腦血管疾病（如腦供血不足、腦血栓形成、腦栓塞）。探索磷酸川芎嗪滴丸抗血小板聚集以及對(duì)已聚集的血小板具有解聚作用的機(jī)制，為臨床預(yù)防和治療血栓性疾病，特別是缺血性心腦血管疾病提供安全有效的藥物選擇，指導(dǎo)臨床合理用藥具有重要意義。
本文通過對(duì)川芎嗪藥理藥效研究文獻(xiàn)以及血小板相關(guān)研究成果的分析，探討磷酸川芎嗪滴丸的抗血小板聚集和對(duì)已聚集的血小板的解聚作用機(jī)制，以期為開展以阿司匹林為對(duì)照的磷酸川芎嗪滴丸抗血小板聚集非臨床和臨床研究提供參考。
一、血小板檢查
在正常情況下，血小板以分散的狀態(tài)在血管內(nèi)運(yùn)行。但當(dāng)血管損傷或受到刺激時(shí)，血小板則發(fā)生四種相互關(guān)聯(lián)的變化，即形態(tài)和數(shù)量改變、黏附、聚集、釋放反應(yīng)。因此，通過對(duì)血小板的形態(tài)和數(shù)量、黏附、聚集、釋放反應(yīng)進(jìn)行檢查，可以評(píng)判血小板是處于正常生理狀態(tài)還是病理狀態(tài)。以下是常用的血小板檢查方法簡介。
（一）血小板計(jì)數(shù)
將血液經(jīng)過處理后，可用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢查血小板數(shù)量，并用顯微鏡觀察血小板的形態(tài)。
（二）流式細(xì)胞術(shù)分析血小板
流式細(xì)胞術(shù)是一種生物學(xué)技術(shù)，用于對(duì)懸浮于流體中的微小顆粒進(jìn)行計(jì)數(shù)和分選。這種技術(shù)可以用來對(duì)流過光學(xué)或電子檢測器的一個(gè)個(gè)細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)的多種參數(shù)分析。其特點(diǎn)是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等來定量測定細(xì)胞DNA含量、細(xì)胞體積、蛋白質(zhì)含量、酶活性、細(xì)胞膜受體和表面抗原等許多重要參數(shù)。根據(jù)這些參數(shù)將不同性質(zhì)的細(xì)胞分開，以獲得供生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究用的純細(xì)胞群體。
使用流式細(xì)胞儀檢測全血中的血小板含量以及血小板表面的相關(guān)標(biāo)志物，可供分析血小板的功能及其生理或病理狀態(tài)。
（三）血塊收縮試驗(yàn)
已凝固的新鮮血塊，在血小板收縮蛋白的作用下，使血塊中纖維蛋白網(wǎng)眼縮小，血清析出。血塊收縮試驗(yàn)即在一定條件下觀察這一過程，是反映血小板功能的篩選試驗(yàn)，是在富含血小板的血漿中加入鈣離子和凝血酶，使血漿凝固形成凝塊。血小板收縮蛋白使血小板伸出偽足，偽足前端連接到纖維蛋白束上。當(dāng)偽足向心性收縮，使纖維蛋白網(wǎng)眼縮小，檢測析出血清的容積可反映血小板血塊收縮能力。
（四）血小板的制備
血小板的制備方法主要有富血小板血漿（PRP）的制備、洗滌血小板的制備、凝膠過濾血小板（GFP）的制備等方法。
PRP是自體全血經(jīng)離心后得到的血小板濃縮物，其血小板濃度至少高于基線濃度的2倍，其中含有大量生長因子及蛋白質(zhì)，可用于血小板功能檢測。
洗滌血小板是將血小板與血漿蛋白分離，使進(jìn)行的血小板的相關(guān)實(shí)驗(yàn)不受血漿蛋白的影響。
制備GFP能更好地將血小板與血漿蛋白分離，能更多地保留血小板在血漿中的形態(tài)和功能，可以比較單純地研究藥物對(duì)血小板的作用而減少血漿中某些抑制因子、抗體、補(bǔ)體等其他因子對(duì)藥物作用的干擾。
（五）血小板黏附功能實(shí)驗(yàn)
當(dāng)血液與一定表面積的異物接觸一定時(shí)間后，血小板會(huì)黏附在異物的表面，而使血液中的血小板數(shù)量減少，測定接觸異物后血液中血小板的數(shù)量之差，即為黏附于異物表面的血小板數(shù)，由此可計(jì)算出血小板的黏附率。常用的方法有玻球瓶法、玻璃球柱法、玻璃濾器法、膠原黏附法、改良旋轉(zhuǎn)玻球法等。
（六）血小板聚集功能實(shí)驗(yàn)
血小板與血小板之間相互黏附、聚集成團(tuán)，即為血小板聚集，是血小板的重要功能。一般認(rèn)為血小板聚集的簡單模式為：血小板膜受體-連接蛋白（調(diào)節(jié)蛋白-血小板膜受體。其中血小板膜受體為糖蛋白IIb/IIIa（GP IIb/IIIa）復(fù)合物連接蛋白為纖維蛋白原（Fg），調(diào)節(jié)蛋白為血小板反應(yīng)素（TSP）或纖連蛋白（FN）或血管性血友病因子（vWF）。血小板在靜息狀態(tài)下，90%的GP IIb和IIIa以復(fù)合形式存在，但當(dāng)血小板被激活時(shí)，GP IIa/IIIb受體位點(diǎn)暴露，并與Fg結(jié)合，導(dǎo)致血小板聚集。此外，GP IIa/IIIb也能與含精氨酰甘氨酰天冬氨酸的黏附蛋白如纖維結(jié)合蛋白（Fn）、vWF結(jié)合等。在體外，血小板一般需要在誘導(dǎo)劑刺激下才發(fā)生聚集，已知可誘導(dǎo)血小板聚集的誘導(dǎo)劑有二磷酸腺苷（ADP）、膠原、凝血酶、腎上腺素、花生四烯酸等。但當(dāng)血小板活化程度增高時(shí)，也可能發(fā)生自發(fā)性聚集。血小板聚集有二個(gè)時(shí)相，第一個(gè)時(shí)相聚集代表血小板聚集物的形成，第二個(gè)時(shí)相的聚集代表釋放反應(yīng)的發(fā)生。
血小板聚集功能實(shí)驗(yàn)可以用于評(píng)價(jià)藥物的抗血小板聚集作用，常用的方法有比濁法、比值法、血栓法等。
（七）血小板釋放試驗(yàn)
血小板釋放與聚集密切相關(guān)，ADP、腎上腺素等引起的第二相聚集就代表了釋放反應(yīng)。膠原誘導(dǎo)的聚集則是通過釋放血小板內(nèi)ADP等物質(zhì)所引起的，在這種條件下，血小板聚集實(shí)際上是血小板釋放的結(jié)果。藥物抑制ADP等誘導(dǎo)的第二相聚集或膠原誘導(dǎo)的聚集就是對(duì)血小板釋放的抑制。
血小板被激活時(shí)，將其顆粒物釋放到血漿中，首先為α顆粒內(nèi)容物，包括血小板因子4（PF4）和β血小板球蛋白（β-TG）的；其次為致密顆粒內(nèi)容物，如ADO、5*羥色胺、血栓素A2和鈣離子等。血小板釋放的這些物質(zhì)又可作用于其膜上的相應(yīng)受體，使血小板進(jìn)一步激活。血小板釋放試驗(yàn)主要有β-TG和PF4的核素測定法及酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法（ELISA）、血小板表面α顆粒膜蛋白-140（GMP-140測定法等。
（八）血小板膜流動(dòng)性測定
血小板膜流動(dòng)性對(duì)維持血小板正常功能具有重要作用，血小板黏附、聚集、釋放、血凝、止血以及血栓形成等過程均與血小板膜流動(dòng)性變化有關(guān)。檢測血小板膜的流動(dòng)性可以用于評(píng)價(jià)抗血小板聚集藥物的作用。
（九）血小板膜糖蛋白測定
血小板膜糖蛋白（GP）是血小板參與止血、血栓形成等多種生理、病理過程的分子基礎(chǔ)，根據(jù)其分布特點(diǎn)，分為血小板質(zhì)膜糖蛋白與顆粒膜糖蛋白兩大類。質(zhì)膜糖蛋白主要有GP Ib-IX復(fù)合物、GP IIb/IIIa復(fù)合物等。顆粒膜糖蛋白主要有α顆粒膜糖蛋白-140、溶酶體相關(guān)膜糖蛋白-2等。正常的血小板功能依賴于其膜表面的糖蛋白和血漿蛋白、血管壁的相互作用，一旦血小板膜糖蛋白的質(zhì)或量發(fā)生異常改變、常可導(dǎo)致出血或血栓形成，測定血小板膜糖蛋白對(duì)研究血小板功能具有重要價(jià)值。放射免疫法、流式細(xì)胞儀法是常用的血小板膜糖蛋白檢測方法。
二、血小板聚集原理
血小板的聚集始于各種誘導(dǎo)劑與血小板膜受體之間的相互作用。這種相互作用通過膜的傳遞而激活血小板，使血小板膜表面的糖蛋白IIb/IIIa受體活化，再與血漿中的纖維蛋白原結(jié)合，中介血小板聚集。血小板的聚集依賴于血漿中的凝血因子、纖維蛋白原及各種聚集誘導(dǎo)劑等的存在以及血小板膜表面的糖蛋白和血漿蛋白、血管壁的相互作用。
血小板激活是血小板聚集的主要原因。活化的血小板可導(dǎo)致血小板黏附、聚集和釋放反應(yīng)，在血栓性疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。血小板激活主要有二磷酸腺苷、花生四烯酸、血小板活化因子三條途徑。
二磷酸腺苷是正常血細(xì)胞釋放的生理性活性物質(zhì)，通過結(jié)合細(xì)胞膜表面的特異性受體，激活磷脂酶C，促進(jìn)鈣離子的釋放，從而誘導(dǎo)血小板的黏附、聚集和釋放反應(yīng)，是血小板激活的二磷酸腺苷途徑。
血小板激活的花生四烯酸途徑主要是通過環(huán)氧化酶的作用生成血栓烷A2，從而誘導(dǎo)血小板聚集。血栓烷A2是目前已知的體內(nèi)最強(qiáng)的血小板聚集因子。
血小板活化因子途徑，也稱為凝血酶誘導(dǎo)的血小板聚集途徑，是通過作用于血小板膜表面的特異性受體，從而導(dǎo)致血小板活化，是不依賴二磷酸腺苷途徑和花生四烯酸途徑的第三條途徑。
三、血小板聚集機(jī)制
在血液正常循環(huán)過程中，血小板為靜止?fàn)顟B(tài)。當(dāng)給予生理或病理因子刺激時(shí)，血小板被激活并黏附于暴露的內(nèi)皮組織下。在纖維蛋白原（vWF）存在的情況下，釋放反應(yīng)和花生四烯酸代謝則啟動(dòng)，這一行為發(fā)生于被激活的局部或皮下組織形成的凝血酶中。前者分泌二磷酸腺苷（ADP）和由后者形成的血栓素A2可誘導(dǎo)血小板聚集。此外，血小板膜糖蛋白IIb/IIIa（GP IIb/IIIa）受體調(diào)節(jié)血小板聚集，纖維蛋白原和被激活的GP IIb/IIIa受體結(jié)合，與血小板結(jié)合形成血栓和骨架，參與生理性止血和病理性血栓形成。
四、血小板聚集檢測
血小板聚集率是診斷血小板疾病、評(píng)估血栓形成、了解個(gè)體對(duì)抗血小板藥物的反應(yīng)、輔助臨床制定抗血小板治療策略、提高抗血小板治療藥物的療效和安全性的一種重要評(píng)估方法。常用的血小板聚集檢測方法主要有
光學(xué)比濁法、剪切誘導(dǎo)血小板聚集測定法、散射性粒子檢測法、全血電阻抗法、血小板計(jì)數(shù)法、微量反應(yīng)板法、流式細(xì)胞儀法等。其中，光學(xué)比濁法測定血小板聚集率與臨床事件的相關(guān)性較好，臨床應(yīng)用較普及，是血小板聚集功能檢測的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
光學(xué)比濁法是將富含血小板的血漿（PRP）放置在比色管中，然后用涂有硅的小磁粉攪拌。血小板逐漸積累，血漿濁度下降，透光度增加。利用血小板聚集儀將濁度變化轉(zhuǎn)化為電信號(hào)，并記錄其變化，血小板聚集W的動(dòng)態(tài)曲線自動(dòng)計(jì)算血小板聚集率。
五、抗血小板聚集作用機(jī)制
抗血小板聚集機(jī)制可分為抑制花生四烯酸代謝途徑、影響核苷酸系統(tǒng)［升高血小板內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）和環(huán)磷酸鳥苷（cGMP）含量］、抑制血小板膜受體（GP）活性、抑制血小板內(nèi)容物釋放四類。
（一）抑制血小板花生酸的代謝途徑機(jī)制
花生四烯酸是全順式﹣5,8,11,14﹣二十碳四烯酸（AA），是一種不飽和ω-6脂肪酸，廣泛存在于人和動(dòng)物體內(nèi)，尤其是在神經(jīng)末梢處含量達(dá)70%，在維持機(jī)體細(xì)胞膜功能結(jié)構(gòu)等方面具有重要的作用。抑制AA代謝途徑是抗血小板聚集的重要作用機(jī)制之一，當(dāng)AA進(jìn)入血液后，在環(huán)氧合酶（COX-1）作用下分解為前列腺素H2（PGH2）和前列腺素G2（PGG2），PGH2和PGG2分別經(jīng)由血栓素合成酶和前列環(huán)素合成酶生成血栓素A2（TXA2）和前列環(huán)素（PGI2），TXA2和PGI2具有完全相反的藥理活性，其中TXA2具有促進(jìn)血管收縮、降低環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平、誘導(dǎo)血小板聚集的功能，而PGI2能提高腺苷酸環(huán)化酶活性，導(dǎo)致血小板cAMP水平升高，從而促進(jìn)血管擴(kuò)張，抑制血小板聚集。
TXA2和PGI2均為花生四烯酸的代謝產(chǎn)物。因此，抑制花生四烯酸代謝，保持TXA2和PGI2在機(jī)體內(nèi)的動(dòng)態(tài)平衡對(duì)于抑制血小板聚集至關(guān)重要。
（二）影響核苷酸系統(tǒng)，抑制血小板中cAMP的增加機(jī)制
核苷酸系統(tǒng)主要包括環(huán)磷酸腺苷（cAMP）系統(tǒng)和環(huán)磷酸鳥苷（cGM）系統(tǒng)。?cAMP是一種重要的第二信使，?參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，?調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能。?cGMP雖然含量低于cAMP，?但也扮演著重要的角色，?特別是在與cAMP效應(yīng)相對(duì)抗的激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮作用。?這兩種環(huán)核苷酸在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起著關(guān)鍵作用，?涉及到多種生理過程的調(diào)節(jié)，?包括但不限于生長、?分化、?代謝、?免疫和神經(jīng)等方面的調(diào)控。
cAMP是由腺苷酸環(huán)化酶水解三磷酸腺苷生成，是細(xì)胞內(nèi)的重要信號(hào)傳輸物質(zhì)，在磷脂酶C（PLC）介導(dǎo)的血小板聚集和釋放具有重要的調(diào)控作用。cGMP是由三磷酸鳥苷經(jīng)由鳥苷酸環(huán)化酶分解產(chǎn)生的，它可以經(jīng)由非依賴性通路和依賴性通路對(duì)血小板聚集進(jìn)行調(diào)控，并且可以降低細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，使得血管得到舒張從而達(dá)到抑制血小板聚集的目的。因此，提高血小板內(nèi)cAMP和cGMP的水平或者抑制其水解是抑制血小板聚集的重要通路。
以三磷酸腺苷（ATP）和腺苷酸環(huán)化酶為催化劑，合成血小板cAMP。藥物通過激活腺苷酸環(huán)化酶的活性，促進(jìn)cAMP合成或減少cAMP的降解，或通過抑制磷酸二酯酶活性，減少cAMP降解、增加血小板內(nèi)cAMP，發(fā)揮抗血小板聚集的作用。
此外，一氧化氮（NO）激活可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，增加血小板cGMP濃度，從而抑制血小板黏附和聚集，并通過cGMP和cAMP雙通路抑制血小板鈣離子水平，從而抑制血小板聚集。cGMP還能抑制環(huán)腺苷磷酸酶的活性，致cAMP濃度增加而使細(xì)胞質(zhì)中鈣離子濃度的降低，從而抑制血小板聚集、黏附反應(yīng)和脫粒作用；環(huán)氧酶可升高前列環(huán)素，抑制血小板表面糖蛋白GP IIb/GMP-140的表達(dá)增加。因此，抑制一氧化氮供體，可以達(dá)到抗血小板聚集的目的。
（三）抑制血小板膜糖蛋白（GP）受體活性機(jī)制
血小板膜上的蛋白質(zhì)種類多樣，這些蛋白質(zhì)不僅能夠維持血小板形態(tài)完整及功能正常運(yùn)行，同時(shí)也構(gòu)成了血小板上各種活性化合物的受體，這些受體根據(jù)其功能及相應(yīng)配體的差異可分為選擇素受體、誘導(dǎo)劑受體和黏附受體，通過抑制血小板膜蛋白上的受體與相應(yīng)化合物結(jié)合可達(dá)到抗血小板聚集的目的。血小板膜糖蛋白IIb/IIIa（GP IIb/IIIa）是血小板膜上的主要受體，該受體會(huì)與纖維蛋白原結(jié)合，從而引起血小板聚集，當(dāng)加入相應(yīng)抗血小板聚集藥物時(shí)，該藥物會(huì)抑制纖維蛋白原與GP IIb/IIIa 受體結(jié)合，從而降低TXA2的含量，抑制血小板聚集。黏附受體包括血小板膜糖蛋白VI（GP VI）和血小板膜糖蛋白I a/IIa（GP Ia/IIa）兩個(gè)亞型，通過對(duì)GPV I受體誘導(dǎo)劑CRP或GP Ia/IIa受體的抑制，可以對(duì)膠原誘導(dǎo)的磷酸化作用起到抑制，從而抑制血小板的聚集。另外，當(dāng)血管受損時(shí)，血小板會(huì)黏附于受到損傷的血管上，使血小板被激活并且釋放活性誘導(dǎo)劑（ADP、TXA2和 5-HT 等），從而加快血小板聚集，因此抑制血小板聚集的途徑之一是抑制血小板激活后釋放的誘導(dǎo)劑與血小板膜糖蛋白受體的相應(yīng)結(jié)合。除了上述受體之外，抗血小板聚集也可以通過拮抗THR受體、內(nèi)源性血小板活化因子（PAF）受體和P2Y12受體等達(dá)到抑制血小板聚集的目的。
P﹣選擇素（GMP - 140）主要參與白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附。這種效應(yīng)需要血小板活化因子（PAF）與vWF的結(jié)合。因此，血小板GP IIb/IIIA受體拮抗劑能有效地預(yù)防血小板介導(dǎo)的血栓形成。血小板黏附和聚集與vWF相關(guān)，胞內(nèi)鈣離子升高可作為血小板活化的第二信使，激活Gp IIb/IIIa，與vWF連接，并通過vWF形成與血小板間的牢固聯(lián)系。因此，通過抑制血小板鈣內(nèi)流和抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞I-CAM-1的表達(dá)，可以降低GMP-140的水平。
（四）抑制血小板內(nèi)容物釋放機(jī)制
血小板中的亞細(xì)胞器如α顆粒和致密顆粒會(huì)放出相應(yīng)的內(nèi)容物，如血管性血友病因子（vWF）、血小板因子、P﹣選擇素、纖維蛋白原、蘇氨酸（THR）、5-HT、腺苷三磷酸（ATP）、ADP、血小板活化子（PAF）和鈣離子等，這些內(nèi)容物會(huì)導(dǎo)致血栓和動(dòng)粥樣硬化斑塊的形成。
競爭結(jié)合受體，或影響激動(dòng)劑與受體結(jié)合，通過抑制血小板膜受體起作用。它可以抑制某些特定誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的聚集，如凝血酶、膠蛋、腎上腺素、5-HT等，從而達(dá)到抗血小板聚集的目的。
六、血小板聚集解聚機(jī)制
血小板解聚是血小板聚集的可逆過程，主要發(fā)生在第一聚集時(shí)相，由受損組織釋放的ADP引起。在這個(gè)過程中，聚集后的血小板又能自行分離，稱為解聚。
在血小板聚集過程中血小板模糖蛋白IIb/IIIa（GP IIb/IIIa）、血漿纖維蛋白原和細(xì)胞外的鈣離子起著重要作用，而GP IIb/IIIa能形成鈣離子依賴性復(fù)合物，鈣離子則作為纖維蛋白原受體，使血小板之間形成蛋白橋鏈，聚集成團(tuán)。維持ADP誘發(fā)的血小板聚集，需要外源性鈣離子及內(nèi)源性鈣離子的動(dòng)員，鈣離子的動(dòng)員是血小板被激活的最終信號(hào)。因此，調(diào)節(jié)鈣離子可能是血小板解聚的作用機(jī)制。
七、抗血小板聚集藥物
（一）血栓烷抑制劑
水楊酸類藥物ASA通過抑制環(huán)氧化酶（COX）減少血栓素A2的合成，發(fā)揮抗血小板作用，如小劑量阿司匹林不可逆阻斷乙酰化環(huán)氧酶（COX2）活性部分，阻斷TXA2生成。
（二）磷酸二酯酶抑制劑
磷酸二酯酶抑制劑能抑制ADP誘導(dǎo)的血小板聚集，增加血小板內(nèi)cAMP含量，抑制血小板聚集。
1、磷酸二酯酶抑制劑
（1）雙嘧達(dá)莫
雙嘧達(dá)莫能抑制磷酸二酯酶，增加cAMP，抑制紅細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)腺苷的攝取和代謝，激活血小板腺苷環(huán)化酶，增加cAMP含量促進(jìn)前列環(huán)素的釋放，抑制TXA2的形成。
（2）西洛他唑及其代謝產(chǎn)物（cAMP-PDEIII抑制劑）
這類藥物能抑制cAMP活性及其降解和轉(zhuǎn)化，致血小板和血管cAMP增加，抑制血小板聚集。
2、ADP受體拮抗劑
（1）噻氯吡啶
噻氯吡啶是第一代噻吩并吡啶類藥物，不可逆地與P2Y12結(jié)合，競爭性抑制ADP、花生四烯酸（AA）、膠原、血小板活化因子（PAF）等所引起的血小板聚集和釋放，阻礙GPIIb/IIIa受體與纖維蛋白原結(jié)合，抑制血小板的激活。
（2）氯吡格雷
氯吡格雷是第二代ADP受體拮抗劑，是非活性藥物的前體，被肝細(xì)胞色素P450混合功能氧化酶（CYP450酶）氧化為具有活性巰基基團(tuán)的活性代謝物，與P2Y12（ADP受體）半胱氨酸殘基形成二硫鍵，阻斷ADP活化血小板聚集，抑制血小板聚集。
（3）普拉格雷
普拉格雷是第三代血小板ADP受體拮抗劑，無活性的前體藥物，需經(jīng)CYP450酶代謝轉(zhuǎn)化至活性代謝物，不可逆地抑制血小板上的P2Y12受體經(jīng)肝臟生物轉(zhuǎn)化為活性代謝物，發(fā)揮不可逆阻斷ADP的作用。
（4）坎格雷洛
坎格雷洛與P2Y12受體可逆性結(jié)合，競爭性抑制其與ADP結(jié)合，在體內(nèi)不經(jīng)代謝就能產(chǎn)生活性，迅速抑制血小板聚集反應(yīng)。（5）替格瑞洛
替格瑞洛是新型小分子P2Y12受體抑制劑，是新型、可逆、有直接活性的ADP受體抑制劑，藥物本身及其代謝產(chǎn)物均有活性。
（6）依諾格雷
依諾格雷是喹唑咻二酮一族，能快速與P2Y12受體可逆性結(jié)合，是一種強(qiáng)效、非前體、選擇性、競爭性和可逆性的P2Y12受體拮抗劑，其半衰期為12h，無過多的出血問題。
（三）5-HT受體拮抗劑
5-HT受體拮抗劑是一種神經(jīng)遞質(zhì)和血管活性物質(zhì)，其中90％以上的5-HT儲(chǔ)存在血小板中。其受體有兩類：5-HT1受體和5-HT2受體。血液中的5-HT2可以活化血小板及血管平滑肌中的5-HT2受體，促進(jìn)血小板聚集。迄今為止已發(fā)現(xiàn)人類5-HT受體至少有七大類。沙格雷酯能特異性地與5-HT2受體結(jié)合而抑制血小板的聚集，臨床上可用于慢性缺血性血管閉塞癥等多種血栓性疾病。
（四）膜蛋白受體抑制劑
血小板GPIlb/IIIa受體拮抗劑結(jié)合到受體上，阻礙GP IIb/IIIa受體與黏附蛋白結(jié)合，從而抑制血小板的聚集。
1、阿昔單抗
阿昔單抗是血小板GP IIb/IIIa 受體的人與鼠嵌合單克隆抗體（C7E3），非特異性與GP IIb/IIIa受體結(jié)合，阻礙纖維蛋白原與GPIIb/IIIa結(jié)合，從而抑制血小板聚集。
2、依替非巴肽
依替非巴肽是一種肽類GP II b/IIIa受體拮抗劑，與血小板膜上GP IIb/IIIa受體結(jié)合，占據(jù)其結(jié)合位點(diǎn)，阻礙血小板膜上GP IIb/IIIa受體與纖維蛋白原結(jié)合，從而抑制血小板聚集。
3、替羅非班
替羅非班是非肽類GP IIb/IIIa受體拮抗劑，不具有抗原性，與GP IIb/IIIa受體可逆性結(jié)合，選擇性抑制GP IIb/IIIa，阻斷纖維蛋白原與GPIIb/IIIa結(jié)合，抑制血小板聚集。
八、磷酸川芎嗪滴丸抗血小板聚集及對(duì)已聚集的血小板具有解聚作用機(jī)制探討
川芎主產(chǎn)于四川，是傘形科植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖，藥性辛，溫；歸肝、膽、心包經(jīng)；具有辛香行散溫通作用。上行頭顛，下走血海，內(nèi)行血?dú)猓馍L(fēng)寒。活血力強(qiáng)，治血瘀氣滯諸痛，兼寒者最宜，被前人譽(yù)為“血中之氣藥”。治多種頭痛，屬風(fēng)寒、血瘀者最佳；屬風(fēng)熱、風(fēng)濕、血虛者，亦可選，故前人有“頭痛不離川芎”之言。
川芎含有生物堿、揮發(fā)油、酚類物質(zhì)、內(nèi)脂素以及維生素A、葉酸、蔗糖、甾醇、脂肪油等成分，具有活血行氣，祛風(fēng)止痛的功效。
（一）川芎嗪抗血小板聚集及對(duì)已聚集的血小板具有解聚作用機(jī)制研究
川芎嗪是來源于川芎的生物堿類化合物四甲基吡嗪，具有抑制血小板合成TXA2，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放PGI2，降低TXA2與PGI2的比值，調(diào)節(jié)血栓烷素A2/PGI2系統(tǒng)平衡，抑制血小板和血管平滑肌細(xì)胞的鈣離子內(nèi)流，開放鉀離子-ATP通道，降低凝血過程中的凝血活酶、凝血酶的生成和活性，增加血小板內(nèi)環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量，調(diào)節(jié)相關(guān)生物活性因子水平及調(diào)控某些相關(guān)基因的表達(dá)轉(zhuǎn)錄等，發(fā)揮抗血小板聚集作用。
此外，川芎嗪具有鈣離子拮抗作用，可降低鈣離子含量，阻礙血小板激活和前列腺素代謝途徑，通過抑制花生四烯酸代謝途徑和血小板內(nèi)容物釋放，抑制PG IIb/IIIa受體與纖維蛋白原結(jié)合，從而達(dá)到抗血小板聚集的作用，并通過拮抗鈣離子和鈣調(diào)節(jié)蛋白，阻斷血小板膜纖維蛋白原受體與鈣離子的結(jié)合，破壞血小板之間黏附和聚集的橋鏈，從而使已聚集的血小板解聚。
川芎嗪抗血小板聚集及對(duì)已聚集的血小板具有解聚作用機(jī)制研究概述如下：
1、體外抗血小板聚集作用
在體外川芎嗪能明顯抑制ADP、膠原、凝血酶等誘導(dǎo)的家兔和人的血小板聚集。
2、TXA2合成酶抑制劑
抑制血小板合成TXA2,，而對(duì)其他花生四烯酸（AA）代謝產(chǎn)物無明顯影響，因而推測川芎嗪可能是TXA2合成酶的抑制劑，能明顯增加血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和釋放PGI，阻止局部血栓的形成。
3、鈣離子拮抗劑
川芎嗪能抑制血小板胞漿內(nèi)游離鈣濃度，對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板胞漿內(nèi)鈣濃度的升高，細(xì)胞外鈣的非特異性內(nèi)流均有抑制作用，但以抑制前者為主。
4、抑制血小板活化
川芎嗪能通過增加血小板中cAMP含量，使血小板內(nèi)的鈣離子含量降低，抑制血小板活化，對(duì)THR誘導(dǎo)的血小板聚集具有抑制作用。
5、抑制血小板內(nèi)容物釋放
川芎嗪能降低血小板中磷脂二酰甘油（PIP2）水平，抑制20K 蛋白質(zhì)磷酸化，從而抑制血小板聚集。
（二）磷酸川芎嗪滴丸
磷酸川芎嗪滴丸是南昌弘益藥業(yè)有限公司自主研發(fā)的川芎嗪新型制劑，由磷酸川芎嗪（四甲基磷酸鹽）活性成分與聚乙二醇基質(zhì)采用滴制法制備而成，溶出速率較快，血藥濃度達(dá)峰時(shí)間較短，具有抗血小板聚集、擴(kuò)張小動(dòng)脈、改善微循環(huán)和活血化瘀的作用，并對(duì)已聚集的血小板有解聚作用，用于缺血性腦血管疾病（如供血不足、腦血性形為、腦栓塞）。
目前，南昌弘益藥業(yè)有限公司正在深入開展以阿司匹林腸溶片、硫酸氯吡格雷片為陽性對(duì)照的磷酸川芎嗪滴丸抑制花生四烯酸代謝途徑、抑制血小板內(nèi)容物釋放、拮抗血小板膜受體、影響血小板核苷酸系統(tǒng)、拮抗鈣離子和鈣調(diào)節(jié)蛋白的作用研究，闡明磷酸川芎嗪滴丸抗血小板聚集以及對(duì)已聚集的血小板具有解聚作用的機(jī)制和靶點(diǎn)，為磷酸川芎嗪滴丸治療血栓性疾病，特別是缺血性心腦血管疾病提供依據(jù)。
文獻(xiàn)資料
1、許丹丹等，抗血小板聚集作用機(jī)制研究進(jìn)展，中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2019，37（3）：597～601
2、俞佳峰等，寒涼性活血化瘀中藥及其化學(xué)成分抗血小板聚集作用機(jī)制的研究進(jìn)展，實(shí)用中西醫(yī)結(jié)合臨床，2022，22（20）：124～128
3、王偉娜，血小板聚集試驗(yàn)及其臨床應(yīng)用進(jìn)展，臨床軍醫(yī)雜志，2015，43（11）：874～876
4、潘家綺等，血小板聚集的藥理性解聚，生理學(xué)報(bào)，1989，41（5）：482～488
5、俞佳峰等，溫性活血化瘀中藥及其活性成分抗血小板聚集的作用機(jī)制，中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2023，42（3）：34～40
6、楊銳等，川芎嗪對(duì)人血小板聚集的抑制作用，血栓與止血學(xué)雜志，1994，1（3）100～101
7、魏蕾等，中藥有效成分抗血小板聚集的研究進(jìn)展，安徽醫(yī)藥，2012，16（12）：1879～1881
8、楊銳等，川芎嗪對(duì)血小板聚集三條激活途徑的抑制及解聚作用的探討，中國血液流變學(xué)雜志，1995，5（1）：4～6
9、王珊等，血小板活化的分子機(jī)制及中藥活性成分抗血小板聚集研究進(jìn)展，現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2022，38（14）：2423～2427
10、舒冰等，中藥川芎中有效成分的藥理作用研究進(jìn)展，中國藥理學(xué)通報(bào)，2006，22（9）：1043～1047
本文僅供專業(yè)人士參考。
本文綜合整理自南昌弘益藥物研發(fā)團(tuán)隊(duì)，歡迎轉(zhuǎn)發(fā)，禁止轉(zhuǎn)載，轉(zhuǎn)載授權(quán)請聯(lián)系0791-88161315。
